Práctica 32: Prueba de la sacarosa

PRUEBA DE LA SACAROSA

Fundamento:

La prueba de la sacarosa consiste en situar los hematíes problema en un medio de baja fuerza iónica. En este medio los eritrocitos tienden a fijar el complemento, por lo que cuando los glóbulos rojos presentes en la muestra tienen una sensibilidad alta al complemento, tienden a lisarse.

Material:

• Pipeta Pasteur
• Tres pipetas graduadas ( 1 de 5 ml, 2 de 2 ml y 3 de 0,5 ml)
• Pipeta automática de 100 ul
• Puntas de puntas
• 6 tubos de centrífuga
• Reloj
• Centrifugadora
• Espectofotómetro
• Cubetas de espectofotómetro
• Gradilla.

Reactivos:

• Solución acuosa de sacarosa
• Suero fisiológico

Muestra:

• Sangre venosa

Procedimiento:

1. Cogemos tres tubos de ensayo y lo rotulamos con tubo SF, tubo SC y tubo SP
2. Rellenamos los tubos según la tabla:

	Tubo SF	Tubo SC	Tubo SP
Suero fisiológico (ml)	1.8
Solución de sacarosa (ml)		1.8	1.8
Sangre control (ml)		0.2
Sangre problema (ml)	0.2		0.2

3º. Agitamos los tubos suavemente

4º. Dejamos reposar 30 min
5º. Centrifugamos los tubos a 2000 rpm durante 5 min.

Sobrenadante del tubo SP                            0.3
Líquido resuspendido del tubo SF                0.3

Resultados:

• TB: 0
• TPr: 0.07
• TPa: 0.438

% de hemólisis= A/AM x 100 = 1.60 % 

Hoja de trabajo

1º. ¿Con qué solución se hemolizan los hematíes vertidos en

 el tubo problema?

- solución sacarosa

2º. ¿ A qué concentración se prepara la solución de 

sacarosa?

- Concentración 9.24%

3º. ¿ Como se llama también la sacarosa?

- Azúcar

4º. ¿ Qué es el ACD?

- Anticoagulante

5º. ¿ Cómo se prepara el tubo blanco?

-se prepara vertiendo 5 ml de solución 

aminiaco y 0,3ml de suero fisiológico.

6º. ¿Qué porcentaje de hemólisis suele producirse, con la 

prueba de la sacarosa, en la sangre de la HPN?

- Entre 10 y 80%