Práctica 43: Determinación celular en tubo

DETERMINACIÓN CELULAR  EN TUBO

Fundamento:

Los hematíes problema contienen las sustancias antigénicas del sistema AB0 y se enfrentan a sueros conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos.

El resultado final es la presencia o no de aglutinación en los hematíes reaccionantes.

Material:

• Tubos de centrífuga.
• Tubos de ensayo.
• Rotulador de vidrio.
• Pipetas Pasteur.
• Centrífuga.
• Gradilla.
• Vaso de precipitado.

Muestra: 

• Sangre total anticoagulada. Preferiblemente una suspensión de los hematíes problema.

Reactivos:

• Suero anti-A
• Suero anti-B
• Solución salina.

Procedimiento:

1. Echar en dos tubos de centrífuga, 1 ml de sangre y 3 ml de solución salina.
2. Centrifugar los tubos a 2000 rpm durante 4 min.
3. Desechar el sobrenadante.
4. Una vez que tenemos los hematíes, hacemos la suspensión de hematíes al 2%, es decir, cogeremos 2 gotas de sangre precipitada con 5 ml de solución salina y lo mezclaremos.
5. Rotular tres tubos de ensayo con las letras A,B y AB.
6. Añadir en cada tubo una gota de suspensión de hematíes al 2%.
7. Añadir dos gotas de suero anti-A en el tubo A, dos gotas de suero anti-B en el tubo B y dos gotas de suero anti-AB en el tubo AB.
8. Centrifugar los tubos a 1000 rpm durante 1 min.

Resultados:

Después de centrifugar, golpeamos suavemente el fondo de cada tubo para desprender el sedimento y observar y hay aglutinación o no.

- Reacción negativa: los hematíes se resuspenden homogéneamente.

- Reacción positiva: se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.

También pueden darse falsos positivos por dos motivos:

1. Aglutinación no específica: se debe a la presencia de ácido hialurónico en la sangre, procedente de la gelatina de Wharton del cordón umbilical y se elimina añadiendo una gota de hialuronidasa a la suspensión de hematíes.
2. Fenómeno de Rouleaux: consiste en una agrupación no específica de hematíes, que adoptan una imagen de pilas de monedas. Las sustancias que más frecuentemente originan este fenómeno son: el fibrinógeno, las gammaglobulinas, el dextrano y la polivinilpirrolidona.

Estos fenómenos e pueden evitar con el lavado de los hematíes.

Hoja de trabajo

1. ¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis?

- 

2. ¿A qué concentración se prepara la suspensión de hematíes problema?

- Al 2%

3. ¿Cómo se ve una aglutinación positiva?

- Se ve un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.

4. ¿A qué se debe el fenómeno de Rouleaux?

- Se debe a una agrupación no específica de hematíes, que adoptan una imagen de pilas de monedas.

5. ¿Cómo se pueden evitar los falsos positivos?

- Lavando los hematíes previamente.