Práctica 49. Prueba cruzada mayor

PRUEBA CRUZADA MAYOR

Fundamento

Consiste en enfrentar el suero del receptor con los hematíes del donante, primero en medio salino, posteriormente en medio albuminoso, y por último frente al suero antiglobulina de Coombs.

Con este último paso detectaremos los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria.

Material

• Tubos de hemólisis.
• Centrífuga.
• Baño de agua.
• Pipeta Pasteur.
• Gradilla.
• Reloj.
• Vaso de precipitado.

Reactivos

• Solución salina.
• Albúmina bovina al 30%.
• Suero antiglobulina de Coombs.

Muestra

• Suero del receptor, obtenido de sangre coagulada y libre de hemólisis.
• Hematíes previamente lavados tres veces en solución salina y resuspendidos al 2-5%.

Procedimiento

1. En un tubo de hemólisis depositamos 1 gota de la suspensión de hematíes y 2 gotas del suero del recptor-
2. Mezclamos suavemente y dejamos a temepratura ambiente durante 2-3 minutos.
3. Centrifugamos a 3500 rpm durante 30 segundos.
4. Leemos el resultado obtenido en medio salino.
5. Añadimos al tubo 3 gotas de albúmina bovina.
6. Mezclamos e incubamos a 37ºC durante 30 minutos.
7. Leemos el resultado obtenido en medio albuminoso.
8. Lavamos tres veces los hematíes con solución salina para eliminar losa nticuerpos que no se han fijado a los eritrocitos. Retirar el sobrenadante del último lavado.
9. Añadimos al tubo 1 gota de suero antiglobulina humana de Coombs y mezclamos.
10. Centrifugamos a 1000 rpm durante 2 minutos.
11. Leemos los resultados.

Resultados

La lectura de los resultados se realiza resuspendiendo el botón hemático después de cada una de las centrifugación.

En caso de reacciones débiles positivas, conviene observar al microscopio entre porta y cubre con objetivo de 40x

La ausencia de aglutinación en todos los pasos indica que las sangres son compatibles y por tanto, la transfusión es posible.

La aglutinación en cualquiera de las fases de la prueba indica incompatibilidad.

Hoja de trabajo

1. ¿Qué se enfrenta en la prueba cruzada mayor?

- Suero del receptor y hematíes del donante.

2. ¿Cuando se debe realizar la prueba cruzada menor?

- Cuando se transfunde una gran cantidad de plasma, ya que en este caso, la presencia de anticuerpos en la sangre del donante puede ser peligrosa.

3. ¿Por qué debemos realizar la prueba en medio salino y albuminoso?

- Para detectar todos los anticuerpos posibles.

4. ¿Qué pone de manifiesto el suero antiglobulina de Coombs?

- Anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria.