DETERMINACIÓN DE UN Du
Fundamento
El Du es un antígeno D débil que no se pone de manifiesto en las pruebas normles de determinación del Rh.
Por ello debemos sensibilizar previamente los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti-D, posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs. Si existe el antígeno Du en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana y en la segunda fase darán lugar a la aglutinación en presencia del suero antiglobulina humana.
Es una prueba de Coombs indirecta.
Material
Si existe aglutinación, el resultado es positivo. Indica que en la membrana de los hematíes hay un antígeno Du, y se clasifica la sangre como Rh positivo variante Du.
Por ello debemos sensibilizar previamente los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti-D, posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs. Si existe el antígeno Du en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana y en la segunda fase darán lugar a la aglutinación en presencia del suero antiglobulina humana.
Es una prueba de Coombs indirecta.
Material
- Tubos de centrífuga.
- Centrífuga.
- Pipeta Pasteur.
- Gradilla.
- Baño de agua.
- Reloj.
Reactivos
- Suero anti-D humano.
- Suero antiglobulina humana
- Solución salina.
Muestra
- Hematíes de la sangre problema previamente lavados tres veces en solución salina y suspendidos al 5%.
Procedimiento
- En un tubo añadimos 1 gota de suero anti-D y 1 gota de la suspensión de hematíes al 5%.
- Mezclamos suavemente e incubamos a 37ºC durante 30-45 minutos.
- Después lavamos los hematíes en solución salina tres veces y quitamos todo el sobrenadante en el último lavado.
- Añadimos sobre el sedimento hemático una gota de suero de Coombs y mezclamos suavemente.
- Centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto.
- Leemos los resultados.
Resultados
Observamos la aparición o no de aglutinación mediante golpes suaves en el fondo del tubo.
Si existe aglutinación, el resultado es positivo. Indica que en la membrana de los hematíes hay un antígeno Du, y se clasifica la sangre como Rh positivo variante Du.
En el caso de no existir aglutinación se clasifica la sangre como Rh negativo.
Para evitar falsos positivos debido a una sensibilización previa de los hematíes in vivo, debemos realizar una prueba de Coombs directa con los hematíes problema. Esto nos servirá como control negativo.
Hoja de trabajo
1. ¿Qué contiene el suero de Coombs?
- Anticuerpos antiglobulina humana
2. ¿Qué se detecta con la prueba directa?
- Anticuerpos incompletos que han sensibilizado a los hematíes in vivo
3. ¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta?
- Anticuerpos incompletos libres en el suero
4. ¿Qué buscamos en la sangre del paciente?
- Si el paciente tiene un antígeno Du
5. ¿Qué ocurre si el control es positivo?
- Debemos realizar una prueba de Coombs directa con los hematíes problema.
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